用水浴锅做质粒DNA提取的实验方法

实验方法原理： 

质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时zui主要的DNA载体。

提取质粒的基本步骤分为三步：

①细菌的培养和质粒的扩增

②细菌菌体的裂解

③质粒DNA的纯化

实验材料：        

大肠杆菌

试剂、试剂盒：ris-Hcl EDTA葡萄糖 NaOHKAacNaAc异丙醇溶菌酶酚LB培养基

仪器、耗材：超净工作台、 培养箱、 摇床、 恒温水浴锅、台式离心机、取液器、低温冰箱、冷冻真空干燥机、电泳仪、水平电泳槽、紫外观测仪

实验步骤：

一、材料与试剂准备

       1.  材料：大肠杆菌。

       2.  仪器：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，台式离心机，取液器一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪。

       3.  试剂：

      （1）Solution I ：25 mM Tris-Hcl(pH7.4)，10 mM EDTA(pH8.0)，50 mM葡萄糖，高压灭菌，4℃保存。

      （2）Solution II ：0.2 M NaOH， 1%SDS 现配现用。

      （3）Solution III ：5 N KAc pH4.8，高压灭菌，4℃保存。

      （4）3 M NaAc pH5.2，高压灭菌，4℃保存。

      （5）异丙醇，溶菌酶（8 mg/ml），无水乙醇，70%乙醇，LB培养基，电泳试剂。