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纤维素酶活力的测定

更新时间:2017-10-16  |  点击率:1841

  纤维素酶是一种多组分酶,包括C1 酶、CX 酶和¦Â-葡萄糖苷酶三种主要组分。其中C1酶的作用是将天然纤维素水解成无定形纤维素,CX 酶的作用是将无定形纤维素继续水解成纤维寡糖,Â-葡萄糖苷酶的作用是将纤维寡糖水解成葡萄糖。纤维素酶水解纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将碱性条件下的3,5-二硝基水杨酸(DNS)还原,生成棕红色的氨基化合物,在540nm 波长处有zui大光吸收,在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系,利用比色法测定其还原糖生成的量就可测定纤维素酶的活力。
1.实验材料
(1)纤维素酶制剂 500mg
(2)滤纸 50mg / 份 × 4
(3)脱脂棉花 50mg / 份 × 4
(4)羧甲基纤维素钠(CMC) 510mg
(5)水杨酸苷 500mg
2.主要仪器
(1)可见分光光度计
(2)恒温水浴槽
(3)水浴锅
(4)箱式电阻炉
(5)剪刀
(6)万分之一分析天平
(7)恒温干燥箱
(8)冰箱
(9)试管架
(10)胶头滴管
(11)具塞刻度试管 20mL×24
(12)移液管或加液器 0.5 mL×3;2mL×7
(13)容量瓶 100 mL×6;1000 mL×3
(14)量筒 50 mL×2;100 mL×1;500 mL×1
(15)烧杯 100 mL×6;500mL×3;1 000 mL×1
3.试剂(均为分析纯)
(1)浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液
将葡萄糖在恒温干燥箱中105℃下干燥至恒重,准确称取100mg 于100mL 小烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,移入100mL 容量瓶中用蒸馏水定容至100mL,充分混匀。4℃冰箱中保存(可用12~15 天)。
(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)溶液
准确称取DNS 6.3g 于500mL 大烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,加入2mol/L NaOH 溶液262mL,再加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠(C4H4O6KNa · 4H2O,MW=282.22)的热水溶液中,再加5g结晶酚(C6H5OH,MW=94.11)和5g无水亚硫酸钠(Na2SO3,MW=126.04),搅拌溶解,冷却后移入1 000mL 容量瓶中用蒸馏水定容至1 000mL,充分混匀。贮于棕色瓶中,室温放置一周后使用。
(3)0.05 mol/L pH4.5 的柠檬酸缓冲液A 液(0.1 mol/L 柠檬酸溶液):准确称取C6H8O7 · H2O(MW=210.14)21.014g 于500mL大烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,移入1 000mL 容量瓶中用蒸馏水定容至1 000mL,充分混匀。4℃冰箱中保存备用。

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