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如何用生化培养箱做酚类废水生物处理实验
发布时间:2018-01-09   点击次数:694次

TCP是有机废水中一种zui常见的氯酚类物质,主要来源于造纸、印染、纺织等行业废水。由于TCP的水溶解性较大,且土壤等固体物质对其吸附和固定作用较弱,常以水为载体广泛存在。TCP结构较为稳定,难以降解,且具有三致性,美国环保总局已将其列为了“优先污染物”。利用真菌、青霉菌、曲霉菌和酵母菌等生物法处理酚类废水,工艺简单,效果好。
材料与方法
1.菌种与培养基
菌种:从膨润土中分离得到的一种镰刀菌,确定为层出镰刀菌,属于镰刀菌属。用生化培养箱的培养温度为30℃。
固体培养基:KH2PO41.0g,MgSO4·7H2O0.5g,蛋白胨5g,葡萄糖10g,琼脂15~20g,蒸馏水500mL。灭菌后加入相应浓度的TCP摇匀,在无菌操作台上倒平板,待平板冷却凝固后进行接种,zui后于30℃生化培养箱中倒置培养。
液体培养基:CaCl20.1g,KH2PO40.5g,NaCl0.2g,H2O1000mL,微量元素(FeSO4·7H2O3.82g,CoCl2·6H2O0.25g,H3BO36mg,CuSO4·5H2O2.9mg等)1mL。所有培养基均在121℃下灭菌30min。
孢子悬浊液:在驯化好且长有丰富的白色分生孢子的蛋白胨琼脂培养基中刮取部分孢子置于无机盐固体培养基(含100mg·L-1TCP)上,30℃恒温培养。7d后转接于150mg·L-1TCP的无机盐固体培养基驯化3次,待菌体大量长出后于无菌条件下刮取孢子至无菌蒸馏水中,振荡分散成乳白色的孢子悬液,光密度约为0.1(OD400),孢子个数为3.1×106个·mL-1。

2.试剂与仪器
试剂:氨水,乙醇(纯度>90%),浓盐酸,稀盐酸,三氯酚(TCP)(化学纯),4-氨基安替比林,NaCl,缓冲溶液。
主要仪器:液相色谱仪,电子天平,紫外可见分光光度计,电热恒温鼓风干燥箱,生化培养箱,恒温振荡器,单人水平垂直两用净化工作台,高压蒸汽灭菌器,高速冷冻离心机。

3 .TCP的降解条件
取0.05g过滤出的菌体(湿重)的菌体孢子悬浊液(600nm处吸光度为0.16~0.165),加入50mL液体培养基浓度一定的TCP溶液中,在一定温度、pH、150r·min-1下继续培养,每间隔24h测定TCP浓度,分别研究温度、pH、外加碳源、氮源、氯离子及TCP初始浓度对其降解效率的影响。温度影响实验条件为pH7.0,TCP初始浓度为30mg·L-1,温度25℃、30℃和35℃。pH影响实验条件为30℃,TCP初始浓度为30mg·L-1,pH为2.0~8.0。外加碳源影响实验条件为30℃、pH7.0,TCP初始浓度为30mg·L-1,葡萄糖(1g·L-1.3g·L-1.5g·L-1)。氮源影响实验条件为30℃、pH7.0,TCP初始浓度为30mg·L-1,氮源物质为NH4Cl、NaNO2、蛋白胨、NH4NO3和NaNO3(浓度均为0.2g·L-1)。氯离子影响实验条件为30℃、pH7.0,TCP初始浓度为30mg·L-1,NaCl浓度为0~0.6g·L-1。TCP浓度影响实验条件为30℃、pH7.0,TCP初始浓度为10~50mg·L-1。平行试验3次,取其平均值。

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