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微生物培养基常见的灭菌方法
发布时间:2018-05-14   点击次数:4280次

在发酵过程中,培养基灭菌主要有以下几个原因:如不灭菌,会使生物反应的基质或产物,因杂菌的消耗而损失,造成生产能力的下降;杂菌也会产生代谢产物,这就使产物的提取更加困难,造成得率降低,产品质量下降;杂菌大量繁殖后,会改变反应液的pH值,使反应异常;有些杂菌会分解产物,使生产失败;如果发生噬菌体污染,生产菌细胞将被裂解,使生产失败。

常见的灭菌方法

(一)化学物质灭菌

  原理:药物与微生物细胞中的成分反应,使蛋白质变性酶失活。使用范围:器皿、双手和实验室、无菌室的环境灭菌,不能用于培养基灭菌。

  常用的灭菌剂:甲醛 37%  戊二醛 2%  高锰酸钾 0.1%-0.25%   苯酚 0.1%-0.15%

  漂白粉 5%   过氧乙酸 0.02%-0.2%  酒精 75%   焦碳酸二乙酯 0.01%-0.1%  煤酚皂1%—5%

(二)辐射灭菌

  辐射灭菌的原理是利用高能量的电磁辐射与菌体核酸的光化学反应造成菌体死亡。常用的有紫外线、X射线和γ射线。用于室内空气及器皿表面灭菌。

(三)干热灭菌

  灭菌原理是利用高温对微生物有氧化、蛋白质变性和电解质浓缩作用而杀灭微生物。常用灼烧和电热箱加热,140-180℃ 1-2小时。适于对玻璃及金属用具及沙土管灭菌。上海喆图-干热灭菌箱

(四)湿热灭菌

  灭菌原理是直接用蒸汽灭菌,蒸汽在冷凝时能释放出大量潜热,蒸汽具有强大的穿透力,破坏菌体蛋白和核酸的化学键,使酶失活,微生物因代谢障碍而死亡。水煮常压灭菌:100℃。或饱和蒸汽灭菌:一般121℃,30分钟。适合培养基和发酵设备灭菌。

(五)过滤除菌

  除菌原理是利用微生物不能透过滤膜除菌。方法是使用0.01~0.45 mm孔径滤膜,用于压缩空气、酶溶液及其他不耐热化合物溶液除菌。

  在工业生产中,对于培养基、管道、设备的灭菌,通常采用蒸汽加热到一定的温度,并保温一段时间的灭菌方法,称之为湿热灭菌。湿热灭菌的显著优点是:使用方便,无污染,而且其冷凝水可以直接冷凝在培养基中,也可以通过管道排出。

结束语:培养基灭菌大多数用湿热灭菌。衡量热灭菌的指标很多,zui常用的是“热死时间”,即在限定的温度下杀死原有微生物中一定比例所需的持续时间。影响热灭菌的温度和时间的因素很多,包括:微生物种类、性质、浓度和培养基的性质、浓度等。

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