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荸荠皮中总黄酮和荸荠中多糖抗氧化活性研究
发布时间:2018-11-08   点击次数:696次

 首先喆图小编来给大家讲讲荸荠, 又名马蹄、水栗、芍、凫茈、乌芋、菩荠、地梨,是莎草科荸荠属一种属于多年生浅水性草本植物。我国荸荠的产量占世界的95%以上,长江流域以南各省均有大量栽培,是一种重要的水生植物。

      荸荠皮作为荸荠加工及食用后的下脚料,占鲜荸荠质量的25%左右,资源量很大,然而绝大多数以废物的形式丢弃或作为农户肥料,造成环境污染和资源的极大浪费。黄酮是具有酚羟基的一类还原性化合物,在复杂反应体系中,由于其自身被氧化而具有抗氧化作用。凡符合高分子化合物概念的碳水化合物及其衍生物均称为多糖。

       而在荸荠肉和荸荠皮中含有丰富的多糖类化合物与黄酮类化合物。目前,对于提取植物中黄酮类化合物的方法有好多种,接下来为了有效开发和利用荸荠原料、减轻环保压力,提供一种简单、有效的方法,实验所需材料如下:

1、购买新鲜荸荠,削皮把皮和肉分装处理好备用。

2、荸荠皮:收集新鲜荸荠, 剔除杂质及腐迹, 于鼓风干燥箱中80 ℃烘6 h , 再用粉碎机粉碎备用。

3、荸荠肉:收集新鲜荸荠肉切碎,于鼓风干燥箱中烘干,再用粉碎机粉碎备用。

所需试剂与仪器:

     芦丁标准品、无水乙醇、无水甲醇、苯酚、葡萄糖、浓硫酸、丙酮、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、水杨酸、过氧化氢、 三羟甲基氨基甲烷、盐酸、邻苯三酚(焦性没食子酸)、1,1 - 二苯基-2- 苦基苯肼。蒸馏水、去离子水。 粉碎机、离心机、旋转蒸发器、电热恒温水浴锅鼓风干燥箱、25ml比色管、50 mL 容量瓶、100ml容量瓶、移液管、电子天平、超声清洗器、分光光度计、10ml试管。

      肉中多糖提取: 超声辅助提取法:蒸馏水(料液比1:25),预热10min,超声20min,超声功率80W,提取温度60℃,离心并收集长层清液,加入95%的乙醇使乙醇含量达到 70%以上然后静置沉淀。离心收集沉淀,用无水甲醇,以除去水分和杂质,然后晾干备用。

  皮中黄酮提取   

      乙醇提取法:乙醇60% 超声提取50min。取荸荠皮20g,料液比1:12 提取温度60℃离心后收集上层清液,用旋转蒸发仪蒸干后,加水溶解,溶解完全后转移至容量瓶中。

实验方法:溶液含量测定及溶液配制

     样品溶液含量测定:分别采用芦丁标准曲线法、苯酚-硫酸葡萄糖标准曲线法测定样品溶液里面黄酮与多糖的含量。

黄酮溶液:把黄酮溶解液配成25ml一定浓度梯度。(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8 mg/ml)

多糖溶液:配成与黄酮等浓度梯度的多糖溶液。(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8 mg/ml)

实验操作:

    1、 取5支试管加入不同浓度梯度溶液1 mL,再加入3 mL 浓度为0.04 mg/mL的DPPH 溶液,混合均匀,于室温下避光放置40min,在波长517 nm 处测其吸光度为A1;另各取1 mL 2.4.1溶液于试管中,分别加入无水乙醇3mL,于室温下避光放置40 min,在波长517 nm 处测其吸光度为A2;以3 mL 0.04 mg/mL DPPH 和1mL 无水乙醇反应做为参比,其吸光度记为A0
     2、 清除羟基自由基能力测定 Fenton反应产生羟基自由基,H2O2/Fe2+体系通过Fenton反应产生羟基自由基 化学反应式如:H2O2+Fe2+ →·OH+OH+ Fe3+ ·OH氧化水杨酸会产生有色物质,该物质在510nm处有强吸收峰,若体系 9 里面加入清除·OH的活性物质,则就减少有色物质生成,吸光度值就会降低,吸光度值越低清除·OH效果就越好。

实验操作:

     1、取6支25ml比色管,并依次编号,每支比色管各加入9mmol/LFeSO41ml, 9mmol/L水杨酸-乙醇溶液2ml,按试管编号各加入不同浓度的标题2.4.1溶液2ml,后加入8.8mmol/L H2O22ml启动反应,用去离子水定容至刻度,于室温下反应1h。以去离子水代替溶液作空白对照,在510nm处测定样品的吸光度,记录数据。
清除超氧阴离子能力测定 对超氧阴离子的清除作用,邻苯三酚自氧化反应方法 :

实验操作: 取8支洗净干燥的25 mL比色管依次按照步骤加入

步:编号后依次加入5 mL 25℃预热20min的pH= 8.2浓度为0.05mol/L 的Tris-HCL缓冲液;

第二步:在3-8号加入5 mL标题2.4.1溶液;

第三步:在2-8号加入2.5mL 在25℃下预热20 min浓度为0.5 mmol·L-1 的邻苯三酚溶液;

第四步:然后用去离子水定容至刻度。

第五步:在波长为325 nm下每隔30 s测1次吸光值。以1 号比色管作为空白。记录数据

      以上内容为荸荠在食品和药品领域的有效应用提供理论参考,如需了解详情请联系喆图客服!

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