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细胞传代的操作步骤
发布时间:2019-03-14   点击次数:185次

        喆图小编今天来讲讲细胞传代的操作步骤:需要准备的器材:酒精喷壶、PBS缓冲液、胰酶、培养基、巴氏吸管、水浴锅、移液器、离心管、超净台、CO2培养箱、离心机等。

        然后我们要把我们准备的器材放入超净台,打开紫外杀菌灯灭菌,需要注意的是若培养的细胞对温度比较敏感,将培养基瓶子放入37℃的水浴锅中,使得培养基温度在37℃,再转移到超净台紫外灭菌,当然一般的细胞对培养基的温度不是很敏感,不用对培养基加温也是可以的。细胞培养间也需要紫外照射半小时左右。

        接下来小编就开始来操作了,全程严格无菌操作!

        1、紫外照射灭菌后,穿好灭菌服,戴好灭菌手套和口罩。

        2、从CO2培养箱中取出细胞培养瓶,用酒精喷壶在培养瓶表面喷洒75%酒精消毒,转移培养瓶到超净台。

        3、打开盖子,轻轻吸出旧的培养液,用巴氏吸管加入适量PBS缓冲液洗涤1-2次,弃去PBS缓冲液。

        4、可用移液器加入2-3ml胰酶,“十字”晃动,使胰酶充分接触细胞。

        5、将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜载物台,镜下观察细胞消化情况,当细胞变圆且大量脱落时,准备终止消化,用75%的酒精喷洒培养瓶表面,转移到超净台

        6、用移液器加入等量含血清培养基,终止消化。移液器充分吹打,使细胞能够完全脱落。

        7、将培养瓶中混合液体转移至离心管中,配平,离心5分钟左右。

        8、离心好后,用酒精喷壶喷洒离心管表面,转移进超净台,打开盖子,将上清液倒入废液缸。

        9、加入适量体积含血清培养基,用移液器或巴氏吸管轻轻吹打,制成细胞悬液。

        10、将细胞悬液分装进3个洁净灭菌培养瓶,加入适量培养基,盖好盖子

        11、将分装好的培养瓶置于倒置显微镜载物台,观察细胞情况,细胞应保证一定数量,数量太少会影响生长情况。

        12、在培养瓶上做记号,注明传代时间,细胞种类,操作人员等信息。在放入CO2培养箱之前应再次用酒精喷一喷培养瓶表面,然后整理操作台,用75%酒精擦拭超净台台面,清理废液和垃圾。

        以上内容仅供参考,如需了解请联系喆图客服!

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