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黑曲霉菌孢子悬液的制备

更新时间:2019-04-11  |  点击率:11954

      1、 挑取第 2 代培养物中典型菌落,接种于麦芽浸膏营养肉汤培养基中,置 30℃±1℃ 恒温培养箱中培养 42h~48h,即为第 3 代培养物。

      2、 用 10.0mL 吸管吸取 5.0mL~10.0mL 第 3 代培养物,接种罗氏瓶,并摇动使菌液布满 MEA 培养基表面,将多余肉汤培养物液体吸出,置 30℃±1℃恒温培养箱中培养 42h~48h。

      3、 向罗氏瓶培养物中加入 5.0mL~10.0mL 0.05%(V/V)吐温 80 生理盐水溶液,刮洗黑曲霉菌分生孢子于溶液中,将孢子悬液移入装有玻璃珠的三角瓶中,轻轻振摇 1min ,过滤除去菌丝后,显微镜下(400 倍)观察是否仍有菌丝存在,若有可经 5000 r/min~6000 r/min离心 20min。再次在显微镜下(400 倍)观察,必要时重复上述步骤。

      4、 黑曲霉菌分生孢子悬液冷藏保存不超过 2d,使用前,混合均匀,在显微镜下(400 倍)观察是否有孢子出芽,若有则不得使用。

      5、 将制成的菌悬液,进行活菌培养计数,按其结果用稀释液稀释至所需浓度,悬液定量杀灭试验时,菌悬液浓度为1×107CFU/mL~5×107CFU/mL。

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