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菌类多糖提取
发布时间:2019-04-23   点击次数:538次

       今天喆图小编来讲讲金针菇多糖提取所需试剂仪器设备:蒸馏水、纤维素酶、无水乙醇、、正丁醇、氯化钠、三氯一酸、氢氧化钠 、鼓风干燥箱、浓缩装置、离心机、真空烘箱、冰箱、色谱柱、冷冻干燥机 


       操作过程:原料-预处理--酶解--浸提--浓缩--醇析--脱蛋白--干燥--多糖纯品--精制--多糖精品 
       (1)原料 :新鲜金针菇   
       (2)预处理:新鲜金针菇65°C放入鼓风干燥箱烘干6h制成干品,将金针菇子实体干品粉碎,粉碎粒度为3--5mm,粉碎后装入容器中加入2倍质量的水,在90-95°C条件下加热处理10-15min,得到金针菇子实体匀浆 
       (3)酶解 :向匀浆中加入0.15%的纤维素酶以破坏金针菇子实体的细胞壁,使多糖释放出,来,酶解温度40°C ,ph为4,5时间为3h 
       (4)浸提:向容器中加入20倍样品质量的水,在100°C,ph6.5的条件下浸提1h,过滤并收集滤液 
       (5)浓缩 :将滤液在40°C压力0.2MPa条件下浓缩至原体积是我1/3 
       (6)醇析 :向浓缩液中加入无水乙醇至乙醇含量为70%,可以看到有沉淀析出,静置一段时间至沉淀完全析出,在离心分离,收集沉淀,并于鼓风干燥箱中烘干得到多糖粗品 
       (7)纯化脱蛋白质 : 将多糖粗品按样品与氯方-正丁醇(氯方-正丁醇之比为1:0.2)之比为1:0.25复溶并进行充分震荡,可将游离蛋白变性成为不容性物质,经离心分离去除,此过程通常反复进行5-8次,每次震荡30min,才能很好的去除蛋白质,除蛋白后的多糖溶液进行真空干燥,即可得到纯多糖产品 
       (8)精制:粗多糖粉末溶于0.1mol/L的氢氧化钠溶液中,至于5-8°C低温保存箱冷置12h,离心弃去沉淀、滤液加入40%的三氯一酸使之达到8%的含量,再置于低温冰箱中5-8°C冷置12h离心,将沉淀加入0.1mol/L氯化钠溶液洗脱分离,用硫酸-苯酚跟踪检测,收集(收率约为45%)多糖组分的母液,再取母液以0.1mol/L的氢氧化钠溶液中和至ph6.5-7.0,然后将上述洗脱液适当浓缩,蒸馏透析后,在用色谱分离纯化。用0.1mol/L的氢氧化钠溶液洗脱。收集洗脱液的糖样 

       (9)精品  :  将此糖样经减压浓缩后,冷冻干燥得到的白色粉末状金针菇多糖精品。

         以上内容仅供参考!

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