厌氧菌的培养

        厌氧菌在有氧的情况下不能生长，如产气荚膜梭菌（魏氏梭菌）、肉毒梭菌等厌氧菌，必须在无氧条件下培养。疱肉培养法MAX简单，无需特殊设备。厌氧罐法是应用广泛，是用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境。厌氧袋法在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。厌氧手套箱是一整套系统，是适用的厌氧菌培养法，通常用于厌氧细菌的大量培养研究。

        厌氧菌在有氧的情况下不能生长，如产气荚膜梭菌（魏氏梭菌）、肉毒梭菌等厌氧菌，必须在无氧条件下培养。

        在厌氧培养时，通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。常用的厌氧培养方法主要有疱肉培养基法、厌氧罐法、厌氧袋法、厌氧手套箱法等，可根据实际情况选用。

        一、疱肉培养基法

        疱肉培养基法是MAX简单的厌氧培养法之一，无需特殊设备。将疱肉和肉汤装入大试管，在液面加入凡士林封闭，从而造成无氧环境。在使用前建议将装有培养基的试管沸水浴10-20min，以使培养基中溶解的氧释放出来。

        二、厌氧罐法

        厌氧罐法是目前应用较广泛的一种厌氧培养方法，是用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而进行厌氧菌的培养。厌氧罐法又分为以下两种：

        1、抽气换气法

        该法适用于一般实验室，其特点是较经济，可迅速建立厌氧环境。标本接种后，将平板放入厌氧罐，拧紧盖子，用真空泵抽出罐中空气，使压力真空表至-79.98KPa，停止抽气，充入高纯氮气使压力真空表指针回0位。连续反复3次，MAX后在罐内-79.98KPa的情况下，充入70%的N2、20% H2、10% CO2 (有人改用20% CO2及80% H2，亦可获得好结果)。罐中需放入冷催化剂钯粒，可催化罐中残余的O2和H2化合成水。同时罐中应放有美蓝指示管，美蓝在有氧的环境下呈蓝色，无氧时为红色。临用前首先将美蓝煮沸使变成无色，放入罐中先呈浅蓝色，待罐中无氧环境形成，美蓝即可持续无色。

        2、气体发生袋法

        气体发生袋系由锡箔密封包装，其中含有两种药片，一种为含枸椽酸和重碳酸氢钠的药片，另一种是含有C3H9BNaO3的药片。前者遇水放出二氧化碳，后者可释放氢。使用时在袋的右上角剪一小口，灌进10ml蒸馏水，立即放入含有钯粒、指示剂及平板培养基的厌氧罐中，拧紧盖子。经2-3分钟后，可感到盖子微热并有少量水蒸气出现。密封后1小时左右罐中的O2的含量可低于1%。

        三、厌氧袋法

        厌氧袋法即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。该方法不需要特殊设备，操作简单，使用方便，不但实验室中可用，而且外出采样，现场接种等也可用。原理与气体发生袋法*相同，只是采用塑料袋代替了厌氧罐，气袋为一透明而密闭的塑料袋，内装有气体发生管（有C3H9BNaO3的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。其操作方法为首先将接种的平板培养基放入袋中，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。然后先折断气体发生管，20分钟后再折断美兰指示剂管，如果指示剂不变蓝色，说明袋内达到厌氧状态，即可放入37°C电热恒温培养箱进行培养。

        四、厌氧手套箱法（anaerobic glove box）

        厌氧手套箱是一整套系统，是MAX合适的厌氧菌培养法，通常用于厌氧细菌的大量培养研究。厌氧手套箱是一个密闭的大型箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作。厌氧手套箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落。使用时应严格遵守操作规程，保证箱内气体比例合理。

        厌氧菌在有氧的情况下不能生长，如产气荚膜梭菌（魏氏梭菌）、肉毒梭菌等厌氧菌，必须在无氧条件下培养。疱肉培养法MAX简单，无需特殊设备。厌氧罐法是应用广泛，是用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境。厌氧袋法在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。厌氧手套箱是一整套系统，是适用的厌氧菌培养法，通常用于厌氧细菌的大量培养研究。

        厌氧菌在有氧的情况下不能生长，如产气荚膜梭菌（魏氏梭菌）、肉毒梭菌等厌氧菌，必须在无氧条件下培养。

        在厌氧培养时，通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。常用的厌氧培养方法主要有疱肉培养基法、厌氧罐法、厌氧袋法、厌氧手套箱法等，可根据实际情况选用。

        一、疱肉培养基法

        疱肉培养基法是MAX简单的厌氧培养法之一，无需特殊设备。将疱肉和肉汤装入大试管，在液面加入凡士林封闭，从而造成无氧环境。在使用前建议将装有培养基的试管沸水浴10-20min，以使培养基中溶解的氧释放出来。

        二、厌氧罐法

        厌氧罐法是目前应用较广泛的一种厌氧培养方法，是用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而进行厌氧菌的培养。厌氧罐法又分为以下两种：

        1、抽气换气法

        该法适用于一般实验室，其特点是较经济，可迅速建立厌氧环境。标本接种后，将平板放入厌氧罐，拧紧盖子，用真空泵抽出罐中空气，使压力真空表至-79.98KPa，停止抽气，充入高纯氮气使压力真空表指针回0位。连续反复3次，MAX后在罐内-79.98KPa的情况下，充入70%的N2、20% H2、10% CO2 (有人改用20% CO2及80% H2，亦可获得好结果)。罐中需放入冷催化剂钯粒，可催化罐中残余的O2和H2化合成水。同时罐中应放有美蓝指示管，美蓝在有氧的环境下呈蓝色，无氧时为红色。临用前首先将美蓝煮沸使变成无色，放入罐中先呈浅蓝色，待罐中无氧环境形成，美蓝即可持续无色。

        2、气体发生袋法

        气体发生袋系由锡箔密封包装，其中含有两种药片，一种为含枸椽酸和重碳酸氢钠的药片，另一种是含有C3H9BNaO3的药片。前者遇水放出二氧化碳，后者可释放氢。使用时在袋的右上角剪一小口，灌进10ml蒸馏水，立即放入含有钯粒、指示剂及平板培养基的厌氧罐中，拧紧盖子。经2-3分钟后，可感到盖子微热并有少量水蒸气出现。密封后1小时左右罐中的O2的含量可低于1%。

        三、厌氧袋法

        厌氧袋法即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。该方法不需要特殊设备，操作简单，使用方便，不但实验室中可用，而且外出采样，现场接种等也可用。原理与气体发生袋法*相同，只是采用塑料袋代替了厌氧罐，气袋为一透明而密闭的塑料袋，内装有气体发生管（有C3H9BNaO3的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。其操作方法为首先将接种的平板培养基放入袋中，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。然后先折断气体发生管，20分钟后再折断美兰指示剂管，如果指示剂不变蓝色，说明袋内达到厌氧状态，即可放入37°C电热恒温培养箱进行培养。

        四、厌氧手套箱法（anaerobic glove box）

        厌氧手套箱是一整套系统，是MAX合适的厌氧菌培养法，通常用于厌氧细菌的大量培养研究。厌氧手套箱是一个密闭的大型箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作。厌氧手套箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落。使用时应严格遵守操作规程，保证箱内气体比例合理。