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细胞株说明书、细胞增殖与细胞生长
发布时间:2019-05-27   点击次数:276次

 

        一、细胞株说明书

        细胞株或细胞系在引进时,需要查阅正规的培养物保藏中心的有关细胞株系的编号或产品号。如恶性黑色素瘤A375细胞株,在ATCC(TheAmericanTypeCultureCollection,美国典型培养物保藏中心)的保藏号为CRL-1619。

        从各地保藏中心购买引进的细胞株都应该配套有对应的细胞株说明书,内容包括细胞株的寄存者(MAX初建立株系的负责人)、培养时所用培养基和血清的要求、是否贴壁生长或悬浮生长、建株来源组织细胞种类、繁殖条件(培养条件:培养基种类、血清添加量、其他添加物、CO2浓度、培养温度等)、传代要求(传代时机、传代比例等)、冻存条件(冻存液组方、冻存温度)等。在引进前要充分了解该细胞株的说明书内容,尤其要熟知细胞株的繁殖条件、传代要求和冻存条件等事项。

 

        二、细胞增殖

        典型培养条件下的动物细胞、人类细胞,会正常进行细胞分裂,日渐增加细胞数量。可增殖细胞是细胞具有良好活性的特征。

        增殖也是细胞固有的属性之一,不同细胞株的增殖周期不同,多数培养细胞的增殖周期或细胞周期是20-24h。

        哺乳动物细胞的分裂是二分裂,如果是20-24h分裂一次,那么细胞生长克隆的细胞数与培养天数(n)的关系可以表达为2n-1,如此,第1、2、3、4天的细胞个数分别为1、2、4、8、16。对于静态悬浮细胞培养,依据此关系,通过镜检独立的细胞克隆,计数平均每个独立细胞克隆的细胞个数,则非常容易知道是哪天进行的接种培养。

 

        三、细胞生长曲线

        (一)概述

        在营养物质一定的体外培养体系中,无菌培养条件下,动物细胞的生长状况和生长速度与接入的细胞密度有关系。描述细胞生长的连续变化中细胞密度与培养时间的关系,往往用细胞生长曲线表示,包括迟缓期、对数生长期、稳定期和衰退期。正确的生长曲线描述,依赖正常的培养条件和无菌操作,并且需要熟练的细胞计数操作。细胞生长曲线是以细胞密度为纵坐标、累计培养时间为横坐标作图描绘的折线图,也可以直接以细胞密度作纵坐标、累计培养时间为横坐标在半对数表上作图描绘的折线图。若每隔24h测定细胞密度,可用天(d)作累计培养时间单位,若隔12h或更短时间测定细胞密度,建议使用小时(h)作累计培养时间单位。

        作为细胞生长曲线观察用的培养物,在后续培养过程中,不得改变培养体系即培养液的体积,要确保培养条件的稳定。需要换液时采用定量换液方法操作,使用同样体积的新鲜培养液替代废弃培养液,不干扰细胞团,不取出细胞。培养条件包括温度、CO2浓度、趋饱和湿度,一般要求二氧化碳培养箱37℃、5%CO2浓度、相对湿度90%以上的条件下进行哺乳动物细胞培养。

       (二)生长曲线对于哺乳动物细胞培养的意义

        典型的生长曲线包括迟缓期、对数生长期、稳定期和衰退期这4个时期。生长曲线也是细胞株具有的特有属性,不同细胞株的生长曲线图形不完全一致。

        日常培养的细胞株用于某种目的前,建议预先培养以便观察其细胞生长曲线,了解该细胞株的合理接种密度。

        (1)当接种细胞密度足够高时,将不出现典型的迟缓期或迟缓期很短,并且到达衰退期的累计培养时间MAX短。进行细胞药理或细胞毒理试验时,预培养的细胞接种密度往往控制在1×105-2×105/ml范围,以便在加载供试药物时,所培养的细胞处于对数生长期并已形成单层或接近单层。

        (2)当接种细胞密度合理时,会出现典型的迟缓期,并且到达衰退期的累计培养时间比较短。正因为如此,进行传代培养、原代培养、扩大培养时,一般细胞培养时都要控制接种密度在2×104-5×105/ml范围。

        (3)当接种细胞密度太低时,会出现很长的迟缓期,很难观察到对数生长期、稳定期和衰退期,要观察到衰退期的累计培养时间非常长。在依赖哺乳动物细胞培养进行生物制品生产的过程中,尤其需要避免此种细胞密度下的接种培养,以免造成不必要的经济损失和时间浪费。

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