细胞培养常见污染的识别

⒈细菌

        识别：细菌在显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，有球形，链形，杆形等。大家不必深究。只要发现培养液浑浊变黄，培养瓶顶部有一层细沙一样的东西。就知道大事不好啦。

        处理：可在培养液中加相应的抗生素处理。可以用四环素，庆大霉素，或者链霉素，前两者的工作浓度是50 μg/mL；链霉素的工作浓度是100 μg/mL。其实一旦发生污染，就已经大势已去了。如果细胞不是特别特别珍贵的话，还是趁早扔了，重起炉灶吧。

        所以，重要的还是防范于未然。做好培养间，CO2孵箱，器皿和培养液的消毒灭菌工作。在操作的时候，严格执行无菌操作规范。

⒉霉菌

        识别：因为培养液是清亮的，所以霉菌污染非常难以早期发现，等发现时往往已经为时过晚了。培养液中慢慢地出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，如同风中柳絮。细胞仍可生长，但时间一长，细胞的状态就变差。

        处理：细胞一旦被霉菌污染，很难挽救，两性霉素B或制霉菌素都于事无补，建议果断舍弃该污染细胞，将环境消毒。

        采用酒精底地擦洗一遍CO2培养箱。然后再用新洁尔灭擦洗一遍。把水盘里加上饱和量的硫酸铜。

⒊支原体

        识别：多为多边形，培养液一般会变浑浊。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是和你一起慢慢变老。支原体污染后，可影响的细胞生长参数。故进行实验前，确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。

        处理：没有什么好处理的。直接扔了吧。

⒋黑蛟虫

        识别：谁都不知道所谓的“黑胶虫”是什么东西。据说是纳米级的细菌。低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去。培养液也是不浑的，一般不会太影响。但是如果太多了，也会影响细胞生长和实验结果。

        处理：因为根本不知道这是什么物种，所以也谈不上什么处理方式。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。

⒌真菌

        识别：真菌污染和霉菌污染差不多。一般培养液清亮，所以很难早期发现。镜下有时候象丝状，有时候象珊瑚状。慢慢地会长出很细的黑色丝状物。这个时候，已经晚了，细胞很难救活了。

        处理：同霉菌污染一样，没有什么好处理的，直接扔了吧。然后消毒灭菌培养间，CO2孵箱，器皿和培养液。

        综上所述，两个原则：预防为主，果断扔掉。如果细胞实在特别特别特别珍贵。那就只好死马当活马医了。用广谱抗生素5倍推荐浓度冲击一下。当然细胞状态差的话不熬得住。同时增加传代时的细胞的密度，培养基中的血清浓度，勤换液。也可以不加抗生素进行单克隆有限稀释至96孔板，再克隆化。