蜡样芽胞杆菌的确证实验

⒈染色镜检

        挑取纯培养的单个菌落，革兰氏染色镜检。蜡样芽胞杆菌为革兰氏阳性芽胞杆菌，大小为（1μm～1.3μm）×（3μm～5μm），芽胞呈椭圆形位于菌体中央或偏端，不膨大于菌体，菌体两端较平整，多呈短链或长链状排列。

⒉生化鉴定

        挑取纯培养的单个菌落，进行过氧化氢酶试验、动力试验、硝酸盐还原试验、酪蛋白分解试验、溶菌酶耐性试验、V-P 试验、葡萄糖利用(厌氧)试验、根状生长试验、溶血试验、蛋白质毒素结晶试验。

⒊溶血试验

        挑取纯培养的单个可疑菌落接种于TSSB 琼脂平板上，电热恒温培养箱30 ℃±1 ℃培养24h±2 h。蜡样芽胞杆菌菌落为浅灰色，不透明，似白色毛玻璃状，有草绿色溶血环或*溶血环。苏云金芽胞杆菌和蕈状芽胞杆菌呈现弱的溶血现象，而多数炭疽芽胞杆菌为不溶血，巨大芽胞杆菌为不溶血。

⒋根状生长试验

        挑取单个可疑菌落按间隔0.5cm 左右距离划平行直线于营养琼脂平板上，

        30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h。蕈状芽胞杆菌形成根状生长的特征。蜡样芽胞杆菌菌株不具形成根状生长的特征。

⒌蛋白质毒素结晶试验

        取经电热恒温培养箱30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h 并于室温放置3 d～4 d 的营养琼脂培养物少许于载玻片上，滴加蒸馏水混匀并涂成薄膜。经自然干燥，微火固定后，加甲醇作用30 s 后倾去，再通过火焰干燥，于载玻片上滴满0.5％碱性复红，放火焰上加热（微见蒸气，勿使染液沸腾)持续1 min～2 min，移去火焰，再更换染色液再次加温染色30 s，倾去染液用洁净自来水*清洗、晾干后镜检。观察有无游离芽胞（浅红色）和染成深红色的菱形、正方形或其它形状的蛋白结晶体。如发现游离芽胞形成的不丰富，应再将培养物置室温2 d～3 d 后进行检查。除苏云金芽胞杆菌外其它芽胞杆菌不产生蛋白结晶体。

⒍溶菌酶耐性试验

        用接种环取纯菌悬液一环，接种于溶菌酶肉汤中，36 ℃±1 ℃培养24 h。蜡样芽胞杆菌在本培养基(含0.001 ％溶菌酶)中能生长。如出现阴性反应，应继续培养24 h。巨大芽胞杆菌不生长。