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创伤弧菌的制备及鉴定
发布时间:2019-06-06   点击次数:410次

       创伤弧菌属革兰氏阴性弧菌。在液体培养基中菌体大小为0.7*2-3μm,稍弯曲。在固体培养基中呈多样性。有极端单鞭毛。培养特性:营养要求一般,MAX适生长温度为30℃,兼性厌氧。在无NaCl及超过8%NaCl的培养基中不生长,可在0.5%NaCl及3%NaCl的蛋白胨水中生长,在含6%NaCl的蛋白胨水中生长良好。

         非冷冻样品采集后应立即置7℃~10℃生化培养箱保存,尽可能及早检验;冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min或在2℃~5℃不超过18 h解冻;如果样品需要冷冻贮存,应在样品中加等量缓冲甘油-氯化钠溶液(液体样品应加双料),推荐贮存温度为-70 ℃以下。
甲壳类,则应先在自来水中洗刷外壳并甩干表面水分,然后以无菌操作打开外壳,按上述要求取相应部分。
       以无菌操作取检样25 g(mL),加入3%氯化钠碱性蛋白胨水225 mL,用旋转刀片式均质器以8 000 r/min均质1 min,或拍击式均质器拍击2 min,制备成1:10的均匀稀释液。如无均质器,则将样品放入无菌乳钵中磨碎,然后放在500 mL的灭菌容器内,加225 mL 3%氯化钠碱性蛋白胨水,并充分振荡。鱼类和头足类动物取表面组织、肠或鳃。贝类取全部内容物,包括贝肉和体液;甲壳类取整个动物,或者动物的中心部分,包括肠和鳃。
        嗜盐性试验:挑取纯培养的单个可疑菌落,分别接种于不同氯化钠浓度的胰胨水,生化培养箱内36 ℃±1 ℃培养24 h,观察液体混浊情况。创伤弧菌在无氯化钠、8%氯化钠和10%氯化钠的胰胨水中不生长,在6%氯化钠的胰胨水中生长旺盛。
氧化酶试验:挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试验,创伤弧菌为氧化酶阳性。
涂片镜检:将可疑菌落涂片,进行革兰氏染色,镜检观察形态。创伤弧菌为革兰氏阴性,呈棒状或弧状。
        挑取纯培养的单个可疑菌落,转种3%氯化钠三糖铁琼脂斜面并穿刺底层,36 ℃±1 ℃培养24 h观察结果。创伤弧菌在3%氯化钠三糖铁琼脂中的反应为底层变黄不变黑,无气泡,斜面颜色不变或红色加深,偶尔斜面变黄。
        V-P试验:以接种针由3%氯化钠三糖铁琼脂斜面挑取少许培养物穿刺3%氯化钠MR-VP培养基,36℃±1 ℃培养24 h,在加V-P试剂前应先观察动力。沿穿刺线周围呈扩散性生长为动力阳性。

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