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巨噬细胞的分离培养与鉴定
发布时间:2020-02-21   点击次数:691次

    巨噬细胞是动物机体内重要的免疫细胞, 具有抗肿瘤和免疫调节等重要作用, 被广泛应用于体外免疫增强药物的非特异性免疫功能。有很多能从多种组织和器官中分离纯化巨噬细胞,但这些方法大多都是繁琐、复杂,所需时间长且耗资较大。本实验就以小白鼠腹腔巨噬细胞为研究对象, 探索建立一种巨噬细胞体外分离培养与鉴定简便的方法。

    首先选取一只小白鼠,腹腔注射不含小牛血清的rpmi-1640培养液5ml。轻柔小鼠腹部2-3min,静置5-7min后将小鼠颈椎脱臼处死,至于解剖板上,无菌条件下打开腹腔,用注射器抽取腹腔液,离心5min (1000r/min),弃上清,用pbs洗涤2遍。再用含10%成牛血清的rpmi-1640培养液(0.1%双抗溶液)调节至2×106ml-1,接种于培养瓶及6孔板,置5%的CO2培养箱中37℃培养2h,弃上清。用不含小牛血清的rpmi-1640培养液洗涤2遍,然后加含有10%小牛血清的rpmi-1640培养液在37℃,CO2培养箱中继续培养,倒置显微镜观察细胞形态。

     巨噬细胞的观察与鉴定

     然后称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4度保存。使用时。用pbs稀释至0.4%。; 胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀;

     在三分钟内,分别计数活细胞和死细胞。镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。

     瑞氏染色计算细胞纯度

     细胞涂片自然干燥后,用蜡笔在两端画线,以防染色时染液外溢。随后将玻片平置于染色架上,滴加染液3-5滴,使其盖满涂片,大约1分钟后,滴加等量的染液,用吸耳球轻轻混匀。冲洗:染色5-10分钟用流水染液,待干, 结果观察,将干燥后的血涂片置显微镜下观察。

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