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马蹄金下胚轴体培养与植物再生都要注意哪些?

更新时间:2021-06-02  |  点击率:1012

 

       150L光照培养箱具有超温和传感器异常保护功能,保障仪器和样品安全;选配全光谱的植物生长灯,有利于植物的生长,提高抗病性。具有掉电记忆、掉电时间自动补偿功能;恒温控制系统,反应快,控温精度高。


材料与方法


试验材料

 

       无菌苗下胚轴的获取适量的马蹄金种子,用自来水洗净表面的包衣剂,至露出褐色表皮,再用洗洁精清洗一次后于流水中冲洗10 min,而后转入超净工作台用体积分数70%的酒精消毒30s,再以1 g/L的HgCl,浸泡12 min,最后用无菌水冲洗3次,接种于MS培养基12)中,置于不同的光照条件下萌芽和生长。光照系在上海喆图牌150L光照培养箱中进行,每天光照16 ho培养温度为(25士1) ℃。


愈伤组织的诱导


       种子萌芽5 d后,截取下胚轴靠近子叶端0.5cm长的小段,接种于添加不同植物生长调节剂的MS培养基上,在暗处培养,温度为(25+1)℃。筛选植物生长调节剂组合效果较好的一种,再选用不同的基本培养基作试验,截取同样的下胚轴小段在相同条件下进行培养。


愈伤组织的分化


       将愈伤组织转入添加有不同植物生长调节剂组合的B5培养基L13]上培养诱导分化,同样在上海喆图牌150L光照培养箱中进行光照,每天光照16 h,培养温度为(25士1) ℃。2结果与分析
光照对 下胚轴生长的影响


       从实验可以看出,在全部5 d光照条件下下胚轴生长极为缓慢,而且极短,颜色变绿;在全部黑暗条件下下胚轴生长快速而鲜,较长, 呈白色;先经3 d黑暗培养,然后在2 d光照下培养的下胚轴生长缓慢而且逐渐变绿,长度适中。故为了较短时间内能获得大量下胚轴,宜选择在暗处培养基上生长缓慢,而在15培养基上生长最快,故B5培养基是一种较好的用于获得马蹄金下胚轴愈伤组织的基 本培养基。
讨论


同一种基本培养基附加成分对愈伤组织形成的影响


       愈伤组织的诱导、增殖及形态建成主要受外植体本身、培养基和培养环境三大因素的调控。植物生长调节物质对愈伤组织的诱导及分化具有十分复杂而重要的影响,在植物离体培养过程中,外植体的内源激素水平不断变化,生长素类物质存在极性运输现象,由此导致了其体内分布的特异性改变,这一变化与器官发生和愈伤组织的形成密切相关。培养基中加入生长调节物质可以改变和影响外植体的内源激素水平,同时生长素和细胞分裂素之间也可能相互影响。马蹄金下胚轴在附加不同植物生长调节剂的培养基中培养,都可诱导出愈伤组织,出愈率也较高(≥50%),但植物生长调节剂对愈伤组织生长影响很大。一般在植物生长调节剂浓度较低时,愈伤组织生长状况较好,这可能是因为马蹄金内源细胞分裂素浓度较高,高浓度的外源生长调节剂反而抑制了愈伤组织的生长,从而进一步证实了受伤的植物细胞所释放的物质对诱导细胞分裂具有重要作用。


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