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细胞培养的常见污染原因

更新时间:2022-03-21  |  点击率:1620

       细胞实验室最常面对的难题就是:如何保持无菌。细胞一旦遭到污染,所有的实验结果都会变得毫无意义。

       细胞污染的主要原因包括:操作技术不严格、试剂质量不达标、大气中孢子计数增加、二氧化碳培养箱或操作台使用和维护不当等。

       因此,在细胞培养过程中,操作者不仅要严格遵守标准的操作程序,同时还要特别注意新产品、新品牌、以及设备的清洁维护。同时,及时检测并鉴定细胞是否被污染同样至关重要。

       预防措施:

       在细胞培养过程中,潜在的污染途径主要包括操作技术和环境,其中环境因素又包括了无菌试剂和材料、超净工作台、恒温恒湿培养箱、水浴锅和冰箱等。

       一、操作技术

       培养操作前:

       ⑴ 个人卫生:进入细胞培养室时应更换实验室专用鞋或者穿鞋套;穿戴实验服、口罩和手套,用消毒酒精(75%浓度的乙醇)擦拭双手;如果操作者是长发,应扎于脑后。

       ⑵ 工作台准备:提前 0.5~1h 打开超净台的紫外灯进行消毒;用蘸有消毒酒精的纸巾擦拭超净台的台面、挡板等。

       ⑶ 试剂准备:从冷藏室或冷冻室取出所需的培养基等试剂,于37℃水浴锅中进行加热;加热后用消毒酒精擦拭瓶身,并立马放入超净工作台内。

       须注意的事项有:外套、背包等物品,易附着丰富的微生物,不应带入细胞房。

       培养操作中:

       ⑴ 台面布置:按实验需要和个人习惯,合理放置试剂、耗材、仪器等物品;点燃酒精灯后开始实验操作。

       ⑵ 操作:靠近火焰进行实验操作;试剂瓶经火焰旋转灼烧后打开;挑选吸管,快速的纵向在火焰上来回移动并做 180°旋转;将试剂瓶向吸管倾斜,吸出所需的液体量;灼烧瓶颈后,重新盖上盖子;等所有操作完毕后,拧紧瓶盖。

       须注意的事项有:操作要准确、敏捷、有序;吸取溶液时,应专管专用,避免交叉污染;吸管管口要向下倾斜,以防止液体倒流进入移液器内发生污染;尽量减少细胞和培养基的敞口时间;已开口的试剂瓶尽可能的倾斜放置,防止下落微生物的污染;避免在敞口的细胞培养皿及培养皿盖上方操作;不要面对工作台或二氧化碳培养箱讲话或咳嗽,防止口腔微生物随唾沫飞入而发生污染;若发生外溢,用蘸有消毒酒精的棉球及时擦去。

       培养操作后:

       ⑴ 整理:将试剂放回原来的存储位置;整理工作台面,物归原位,合理丢弃废液和废物。

       ⑵ 消毒:用消毒酒精擦拭台面;打开超净工作台和细胞房的紫外灯,照射至少15 min。

       须注意的事项有:紫外灯开启后,人不能进入,紫外线对眼睛和裸露的皮肤均有危害,若要进入,一定要先关闭紫外灯,待人离开后打开。

       二、环境

       如果操作者技术规范且操作严谨,那么当环境恶化时,也会导致污染风险的增加。进行细胞培养时,环境必须洁净。

       细胞污染一个主要的途径就是二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱在培养细胞取出和放入的过程中,直接与空气接触,微生物会被夹带进入;加之其内部湿度高、温度适宜,特别有利于真菌繁殖。细胞培养瓶或培养皿,如果接触了操作台以外的地方,在放入培养箱前须经消毒酒精擦拭。 但须注意的是,消毒酒精要经操作台吹干,否则会导致培养箱内乙醇浓度升高,酒精会影响细胞的正常功能。

       在很多情况下, 细胞培养必须使用二氧化碳培养箱。为了有效的控制该污染途径,可采取的措施有:

       ①在加湿托盘内添加真菌抑制剂,如硫酸铜、十二烷基磺酸钠,可抑制托盘内真菌的生长;亦或盛装无菌的去离子水,并每周进行更换,托盘用消毒酒精或高温灭菌的方法进行严格的清洁;

       ②使用无毒抗真菌清洁剂对培养箱内外进行定期清洁,先用清洁剂、再用消毒酒精进行擦拭;为不留死角,清洁前应将培养箱内部能拆卸的部件都拆卸下来,清洁时也特别要注意不能拆卸的犄角旮旯处;

       ③不正确的使用空气过滤器,那将变为培养箱一个可怕的污染途径,故须按使用说明定期更换空气过滤器

       ④在使用过程中,任何溢出液必须立刻用消毒酒精清除干净;

       ⑤一旦发现培养物被污染,立马清走。

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