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用电热恒温培养箱做小鼠大脑皮层神经元原代细胞培养
发布时间:2022-03-25   点击次数:273次

  电热恒温培养箱常用于各种细菌细胞培养实验,那小鼠大脑皮层神经元原代细胞是如何培养的的呢?由小喆带大家了解一下。

  小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤:
  1、于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min,解剖出完整鼠脑;
  2、预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗,用眼科剪将皮质反复剪切成碎块;
  3、移入培养皿中,吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1,电热恒温培养箱中37℃消化30min;
  4、将皮层组织碎块移入离心管,弃去剩余消化液,用接种液洗3次,每次洗涤后使组织块充分沉降到试管底,弃去上清液;
  5、最后再用接种液1ml混悬,反复吹打(巴氏吸管)混悬液中组织块,力度适中,至浑浊后将上清液移入培养瓶待用;
  6、加入1ml接种液后再次吹打,如此反复3-4次,组织块逐渐消化后,弃去最终残块;
  7、收集含单细胞悬液的上清液约4-5ml于培养瓶中,以接种液重新悬浮细胞,细胞记数;接种1x107个细胞于6孔培养板中;
  8、培养24h至细胞贴壁后,换全培养液(DMEM/F12+2%B27,engreen)培养3d,观察神经元生长状况;
  9、换用阿糖胞苷培养液(终浓度2.5ug/ml,换半液)培养3d以抑制神经胶质细胞及杂细胞生长,获得单纯培养的原代神经细胞;
  10、每隔3d换全培养液1次,每次换半液。

     以上是小喆简单的见解,关注上海喆图公众号,了解更多小知识


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