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细胞分裂素对离体子叶的保绿效应实验
发布时间:2018-12-03   点击次数:591次

一、 目的

        使用恒温培养箱恒温水浴锅、了解细胞分裂素对离体子叶的保绿作用及基本原理和方法。

二、原理  细胞分裂素可阻碍核酸水解酶和蛋白水解酶的产生,因此能延缓器官衰老,使离体叶片保绿,保绿作用的强弱可通过测定叶绿素含量的变化来衡量,也可由叶色变黄枯死的时间来衡量。  

三、材料、仪器设备及试剂  

1. 材料:黄瓜子叶;萝卜子叶。  

2.  仪器设备:电子分析天平;分光光度计;恒温培养箱;恒温水浴锅;25ml容量瓶;25ml刻度试管;试管架;移液管;黄瓜子叶的培养皿(直径5cm);瓷盘;刀片;尖头镊子;滤纸;吸耳球等。  

3. 试剂及配制:100μg·ml-16-BA溶液;95﹪乙醇 ;CaCO3粉末。  100μg·ml-16-BA母液配制:准确称取6-BA 10mg,  加几滴1mol·L-1HC1溶解(可稍加热溶解),然后慢慢加入蒸馏水稀释后定容至100ml。  

四、实验步骤  

1. 黄瓜幼苗的培养  精选黄瓜种子,播入垫有滤纸的瓷盘中,加蒸馏水使之湿润(注意种子不能渍水),待种子萌发后,在光下培养2~3d左右,直至子叶绿化。备用。  

2. 系列浓度6-BA溶液配制:吸取100μg·ml-16-BA母液,稀释成10、5、0.5  μg·ml-1的系列浓度溶液。  

3. 离体黄瓜子叶的培养  

(1)取4套培养皿,编号,每套培养皿各垫一张滤纸,分别作0.5、5、10μg·ml-1的6-BA溶液和蒸馏水(CK)4个处理,即为组。  

(2)选取子叶大小、生长一致的黄瓜幼苗20株,每处理5  株(10片子叶),用刀片切下不附带叶柄的子叶,分别称取鲜重,将数据记入下表中。然后将子叶放入组相应编号的培养皿中,分别加入不同浓度的6-BA溶液3ml,  对照(CK)加蒸馏水3ml。盖上培养皿盖,置于暗处,温度25-28℃培养3 d 。  另取与组相同的黄瓜幼苗20株,用刀片切下不附带叶柄的子叶作第二组,直接用来测定叶绿素含量。  

4. 第二组黄瓜子叶叶绿素含量的测定  

(1)叶绿素的提取  取3支25ml刻度试管,编号。称取第二组的黄瓜子叶三份(3个重复),每份10片子叶,然后放入相应编号的刻度试管中,各加入少量CaCO3粉及95﹪乙醇3-4ml,用玻棒小心将子叶捣碎后,将试管放入45℃恒温水浴提取叶绿素30min左右,直到子叶碎片无色为止,用滤纸过滤于25ml容量瓶中(如残渣仍带绿色,可再加几ml乙醇继续提取,直至残渣无绿色)。滤纸上的色素用乙醇慢慢点滴清洗入容量瓶中,后定容至刻度,摇匀,待测。  

(2)叶绿素含量的测定  在652nm波长处,以95﹪乙  醇为空白对照,测定叶绿素提取液的吸光度(A值)。并按公式计算出叶绿素含量。即为培养前子叶的原始叶绿素含量。  

5. 组黄瓜子叶叶绿素残留量的测定  组黄瓜子叶在暗处培养3d后,按上述第(4)步骤方法分别测定各处理子叶叶绿素含量,并按公式计算出各处理叶绿素含量,即为暗培养后子叶叶绿素含量。  

五、结果计算  叶绿素含量计算公式: 

D652 × 提取液总量(ml)  叶绿素含量(mg·g-1Fw)= ——————————————  34.5 × 样品鲜重(g)  公式中:D652 — 在652nm波长下测定的吸光度值  34.5— 叶绿素a、b在652nm波长处的比吸收系数  培养后叶绿素含量  暗培养后叶绿素含量占培养前叶绿素含量(﹪)= —————————×100  培养前叶绿素含量

六、恒温培养箱恒温水浴锅详情可咨询喆图小编。

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