抑菌实验

一、 菌种

(一)、细菌：大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草杆菌（Bacillus subtilis） 和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）；

(二)、真菌：啤酒酵母（Saccgaromyces cerevisiae）、米曲霉（Aspergillus  oryzae）3402、黑曲霉（Aspergillus  niger）、叶点霉（Phyllosticta maydis ）和刺盘孢霉（Colletotrichum musae）

二、 培养基

（一） 细菌培养液：LB

液体：胰蛋白胨10.0g  酵母提取物5.0g NaCl 10.0g10mol/LNaOH 100μL 蒸馏水定溶至1.0L    pH 7.0~7.4 如要配置固体LB培养基，加15.0g琼脂糖/L

(二)、真菌培养液：马铃薯培养基(PDA) 马铃薯(去皮切块) 200.0g 葡萄糖 20.0g 琼脂  18.0g， 蒸馏水                1000mL pH 自然

三、    器材

培养皿（90mm）、滤纸、三角耙、接种环、试管

四、 实验步骤

(一)、抑菌圈的测定(滤纸片法)

1、菌种接种  将保存菌种反复转种2次，使菌种新鲜，细菌置30℃，恒温培养箱培养1d，霉菌置27℃，恒温培养箱培养3d，备抗菌实验用

2、菌悬液制备  在超净台里将转接后生长良好的菌种试管斜面注入适量无菌水(约5mL)，接种环轻刮菌落，摇晃，置旋涡混合器混匀。

3、倒平板  在超净台里将培养基倒入平板，每板约15mL左右，水平放置，凝固后倒置放入30℃恒温培养箱中，2d后观察是否有菌落生长，若没有则可供下一步实验使用，否则需重新倒平板。

4、涂布在超净台里用枪取0.1ml菌悬液注入平板，放置5min左右后用三角耙涂布均匀，每种菌设置两个重复平板。

5、贴片在超净台里将平板平均分为6个区，对角设置平行组，同时用无菌水做对照组,硫酸链霉素(10U)作阳性对照。每两张滤纸片(直径1.1cm或0.6cm)为一贴，用镊子夹着滤纸片在样品中轻轻蘸一下后，取出贴在平板的位置，轻摁一下使滤纸片牢固，置(正放)4℃冰箱中放24h。

6、培养24h后放入(倒置)恒温培养箱中培养，细菌30℃，霉菌27℃。细菌培养24h后观察结果，霉菌72h后观察结果。

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