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细胞培养入门
发布时间:2019-04-04   点击次数:694次

所需设备和容器

超净台

生物安全柜

细胞培养箱

显微镜

各种size的细胞瓶、细胞皿,还有细胞培养板。请注意(细胞皿底部是要经过处理的哟,不然细胞无法贴壁。

相关知识

何为细胞培养?

细胞常规培养是在细胞房中进行,在超净工作台或生物安全柜中,把细胞处理好,根据需要加入细胞培养基,放入细胞培养瓶/皿或细胞培养板中,再放到带有5% CO2 的37℃恒温培养箱中培养。细胞就像花花草草,尤其是细胞株基本每天都要观察、打理的哦!

培养的细胞从哪里来?

1.细胞株

简单说就是买的或送的。

2.原代细胞

组织或血液中提取的。一般细胞株可以连续传代,而原代细胞养着养着就挂了。

培养细胞的生长方式有哪些?

1.贴壁生长

必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种肿瘤细胞等。(你把培养皿或培养瓶底朝上,细胞也不会掉下来。

2.悬浮生长

于悬浮状态下即可生长,不需要贴附于支持物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞等。

PS:

每代贴附生长细胞的生长过程分为:

1)游离期:细胞接种后在培养液中呈悬浮状态,也称悬浮期 。

2)贴壁期:细胞贴附于(胶原、玻璃、塑料、其他细胞等)。

3)潜伏期:细胞有省长活动而无细胞分裂。

4)对数生长期:细胞数随时间变化成倍增长,活力十足,MAX适合进行实验研究。

培养细胞需要怎样的生长条件?

1.细胞的营养需要

2.细胞的生存环境

温度:37℃

O2:95%

CO2:5%

PH:7.2-7.4

一定的渗透压

3. 无污染

4.无毒

细胞完全培养基的组成有哪些?

基础培养基:80-95%

血清:5-20%

碳酸氢钠:2.0g/L

青、链霉素:各200单位/毫升

细胞传代

Q1:何为细胞传代?

细胞在培养器皿中生长一定时间后,被分开接种到新的培养器皿即为细胞传代。

 

Q2:为什么要传代?

简单说就是“孩子”长大了,要“分家”!

细胞株在培养过程中数量会不断增多,但是培养细胞的细胞瓶/皿的空间有限,就会导致细胞之间接触过于紧密,会使得细胞增殖收到抑制,所以我们必须把其中一部分细胞转移到别的细胞瓶/皿,让细胞有足够的生长空间。

 

Q3:什么时候传代?

观察培养基是否正常,细胞状态如何,细胞密度如何,决定是否传代。如培养基变黄,细胞长成致密单层等情况。

Q4:传代方法有哪些?

1.悬浮生长细胞传代

1)离心法传代:离心1000转/分去上清,沉淀物加新培养液后再混匀传代。

2)直接传代法:悬浮细胞沉淀在瓶壁上,将上清培养液去除1/2~2/3,然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。

2.半悬浮生长细胞传代

此类细胞部分呈现贴壁生长现象,但是贴壁不牢,可用直接吹打使细胞从瓶壁上脱落下来,进行传代。

3.贴壁生长细胞传代

采用胰酶消化法传代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。

 

靠技术“驯化”细胞

1) 严格无菌操作,多喷喷酒精,要是对灭菌的东西不放心,自己包自己送自己烘干。
2) 不要和别人共用试剂耗材,自己准备一套。
3) 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。
4) 水浴锅很脏,生化培养箱要是得手动加湿的话,盘里的水也会很脏,勤换 (灭菌水加进去)。
5) 晚上离开的时候建议给细胞房照紫外,超净台是用完就开紫外(记得照30min后关掉)。
6) 同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。

 

靠内心"感动"细胞

1) 自己的细胞自己养,血的教训。
2) 在生物安全柜 (或者超净台),枪头,血清管,血清,培养基,瓶子,培养箱都足够好,并且细胞房有良好的卫生措施 (比如隔离服,手套,口罩,清洁,HEPA 等等) 且不违反操作原则的情况下,你其实很难污染。
3) 上述条件不完备的情况下,就要多注意无菌操作了:比如要用的东西提前拿到台子里照啊 (不过这个其实也不大好,因为会挡住紫外线),使用前 SDS+酒精擦台子,进出超净台一定要酒精擦手。
4) 少对细胞说话,多靠内心来感动它们 (是的! 心不诚是不可以的!)

养细胞就像打仗,知彼知己,百战不殆!只有了解你养的对象,才能把它养好!

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