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菌种的诱变育种
发布时间:2019-04-25   点击次数:303次

         喆图小编以紫外线处理产蛋白酶的海洋细菌,通过透明圈法初筛,选择蛋白酶活力高的菌株。

实验材料及设备

         产蛋白酶菌株、超净工作台、电磁力搅拌器、低速离心机、培养皿、涂布器、10mL 离心管、吸管、250mL三角瓶、恒温摇床、电热恒温培养箱、直尺、棉签、橡皮手套。

培养基和试剂
         1、无菌生理盐水、75%酒精

         2、筛选培养基:脱脂奶粉培养基

         3、 海水2216E 液体培养基

实验步骤

         1. 出发菌株移接新鲜斜面培养基,于28℃恒温培养箱恒温培养24h;
         2. 将活化后的菌株接种于液体2216E 培养基,于28℃ 恒温培养摇床150rpm 振荡培养12h;
         3. 取1ml培养液于5ml离心管中,10000rpm 离心5min,弃去上清液,加1ml无菌生理盐水,重新悬浮菌体,再离心,弃去上清,重复上述 步骤用1ml生理盐水恢复成菌悬液;
         4. 将1ml上述菌悬液倒入无菌空平板中,再加入10ml无菌生理盐水,磁力搅拌1min。 
         5. 将紫外灯打开,预热30min;
         6.打开无菌平板盖,紫外照射处理60s,照射完毕后先盖上平板盖,再关闭搅拌和紫外灯;
         7.取处理过的菌悬液0.1ml涂布1个筛选平板;
         8.将诱变菌液在恒温培养箱28℃黑暗中培养过夜,然后在红灯下稀释涂菌进行初筛(避光培养),观察在菌落周围出现的透明圈大小。

         以上内容仅供参考,如需了解详情请联系喆图客服!

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