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微生物菌种管理的相关流程
发布时间:2019-05-05   点击次数:123次

        1.1菌株的采集

        实验室用菌种一是到国家法定机构采购,二是购买商业派生菌种,三是科研中菌种交流。不管是哪种来源,均统一采集。采集中严格按照规范执行。要求包装可靠,采集迅速,不泄漏不污染。保证菌种合格和环境安全。采集中要有菌种传代标识。选择有资质的标准菌株的合格供应商,每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书,来证明所采购的标准菌株是合格的。

        1.2标准菌株和验收

        实验室收到标准菌株,首先应进行符合性感官检查,记录菌株号和标准菌株来源途径信息,确保溯源性清楚。同时还应记录标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等情况。

        1.3冻干标准菌株的复活

        1.3.1开启产品包装:先用70%酒精棉擦拭外包装,再打开使用。

 

        1.3.2复活:选择合适的培养基和培养条件(根据菌种使用说明书,见附录)进行复活。菌种的活化建议是在非选择性琼脂培养基上,除非特殊情况或特别推荐,一般不用液体培养基。冻干菌株的传代次数不得超过5代,从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代。

        1.4工作菌株确认方法及依据

        用无菌接种环取上述培养物,在相应的培养基平板(营养琼脂、大豆胰蛋白胨琼脂)上或相应的细菌鉴别平板(如伊红美蓝、麦康凯、BP等上划线分离单个菌落,置适宜条件下培养(若该类微生物为厌氧菌,则培养条件应为厌氧条件)。以同样方法取真菌和酵母菌至SDA(萨布罗培养基)平板上或玫瑰红钠培养基平板上,电热恒温培养箱23~28℃下培养7d;培养后观察是否具有典型的菌落状态,然后挑取单一纯菌落,进行革兰染色、镜检,观察其染色特征及菌体形态以确定菌种。

        1.5 污染处理

        假如在该平板上发现有其他菌落生长,则说明操作有污染或菌种不纯。要将

该污染培养物做灭菌处理,寻找原因,重新分离挑选纯菌落。

        1.6菌种保存

        所有菌种均由实验室专人(双人双锁)保存于专用冰箱或其它保存方式。要建立菌种登记台帐,详细记录菌种采集、保管、制备、使用、处置情况;每一种菌种一定要有检测鉴定报告(具体的的鉴定方法见菌种质量报告鉴定证书上的方法);

        具体菌种保存方法一般为:

        将复苏后肉汤与灭菌甘油按15%甘油比例(肉汤8.5mL+甘油1.5mL)混合,低温保存箱-30 ℃冻存,(可用2mL冻存管冻存多管),作为保藏储备菌株F1代,也可使用商品化的菌种保存管。

        1.7菌种的传代

        1.7.1标准菌株的复苏:

        ① 菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染。

        ② 每次使用和复苏时只需将小珠在平板上滚动或置肉汤中培养。

        1.7.2标准储备菌株每转接一次须进行确认。(确认方法一般为他们各自独有的形态,在鉴别培养基上的形态)

        1.7.3工作菌株转接的方法:

        ①、配制营养琼脂培养基(溶血性弧菌加3%氯化钠 ),121℃高压灭菌15分钟后分装在试管内,冷却后备用。

        ②、在无菌条件下,用接种环挑取菌苔至新鲜试管上作“米”字形划线接种,放置在36℃的电热恒温培养箱内培养24小时。

        1.7.4工作菌株的使用

        1.7.4.1内部质量控制:一个月一次阳性对照、培养基每批验收;

        1.7.4.2外部质量控制:能力验证、实验室比对;        

        1.7.5工作菌株的期间核查

        1.7.5.1期间核查的频率:每半年对使用标准菌株进行一次期间核查。

        1.7.5.2工作菌株期间核查的方法及依据:同工作菌株的确认一样。

        1.7.5.3建立标准菌株期间核查记录。

        1.8菌种的标识和使用期限:

        1.8.1标识:菌种代数的计算为干粉菌种为第0代,转接一次加一代。具体标识为:例单增李斯特氏菌第0代,标识为DZ-0,代标识为DZ-01代有12支,则DZ-01-01、……、DZ-01-12;并标明日期:如2016.02.13这样填写。

        1.9 菌种的保藏

        1.9.1将试管内菌种放入低温保存箱中2~8℃冷藏保存。

        1.9.2将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中2~8℃保存。每支保存菌种需标明菌名、标准编号、传次、传代日期。

        1.10菌种的销毁

        1.10.1菌种使用后或超过贮存期的应进行销毁。

        1.10.2需销毁的菌种,应用高压蒸汽(121℃)灭菌30分钟。

        1.10.3灭菌后,再进行清洗和处理。

        1.10.4销毁的菌种应做好记录。销毁时由化验负责人监督销毁,保管人员负责销毁。

 

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