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常用培养基及基本特性
发布时间:2019-06-04   点击次数:136次

        培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,使用MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。

        1、Minimum Essential Medium(MEM):也称MAX低必需培养基,它仅含有 12 种必需氨基酸、谷氨酰胺和 8 种维生素。成分简单,可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。MEM-Alpha 一般用于培养一些难培养细胞类型,而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用 MEM 来培养。

        2、BEM(DMEM)培养基:是为小鼠成纤维细胞设计的,现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的4倍,采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。MAX初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长需要,将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L,这就是大家常说的低糖和高糖了。

        DMEM-高糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养, 更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和 DNA 转染的转化细胞的培养。

        DMEM-低糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。

        3、aMEM培养基:含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸,它可广泛应用于各种细胞类型,包括对营养成分要求苛刻的细胞。

        4、Ham’s F12培养基:是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的,现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用,得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物,这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。

        5、DMEM/F12:DMEM/F12 培养基适于克隆密度的培养。F12 培养基成分复杂,含有多种微量元素,和 DMEM 以 1:1 结合,称为 DMEM/F12 培养基。(DMEM/F12medium),作为开发无血清配方的基础,以利用 F12 含有较丰富的成分和 DMEM 含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力,改良之一是在 DMEM/F12(1:1)中加入 15 mMHEPES 缓冲液。

        6、RPMI-1640 Medium:RPMI-1640 广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养,是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像 K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9 等成淋巴细胞、T 细胞淋巴瘤细胞以及 HCT-15 上皮细胞等均可参考使用。

        7、M-199 Medium:1950 年,Morgan 成功研制出具有确定化学成分的细胞培养液,即 M-199,主要用于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。M-199 可用于培养多种种属来源的细胞,并能培养转染的细胞。

        以前大部分实验室都是用干粉培养基,但配制过程就较为繁琐,要溶解、调pH值,过滤,过程中可能会产生一些浓度误差,而且有些实验室的水质并不理想,所以培养的效果会有差异。如果使用液体培养基,这种人为的误差会减少,因为毕竟是大批量工业化生产的,批间差会很小。大家是不是感觉液体培养基会贵很多,以前是这样,但现在非也。

        二、培养基在使用过程中应注意的问题?

        1、 培养基在使用前需电热恒温培养箱内37 ℃预热或在室温平衡后再使用。

        2、 细胞培养过程中,吸取过培养液的吸管不能再用火焰烧灼,防止残留在吸管内的培养基焦化,将有害物质带入培养液中。

        3、 尽量缩短各种液体、细胞的暴露时间。

        4、 避免液体间、细胞间的交叉污染。

        5、配制完全培养基时,配制的量建议在2周内用完为好。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

        6、当在无血清培养基中添加抗生素时,降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下,抗生素不被灭活,可能对于细胞达到毒性水平。

        7、如果细胞培养基偶然被冻,您应该熔化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生,培养基可以正常使用,如果出现沉淀,只能丢弃这些培养基。

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