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wish细胞的传代
发布时间:2021-07-13   点击次数:45次

wish细胞是上皮细胞, 人羊膜细胞 ,培养基我用的是最常见的1640(10%小牛血清,加双抗)。


1、细胞长满培养瓶时既要传代。我用胰酶和edta的混合液消化。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。edta的终浓度是0.02%。


2、使用前37度预热,每个25ml培养瓶加9滴的胰酶和edta混合液,消化液的量可根据自己培养瓶的大小而定,原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶和edta混合液以后,为使酶的活性最大,将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中,5分钟左右即用含血清的培养基终止消化。

如果在室温情况下消化,时间相应加长,可以用手给培养瓶加温,是消化液发挥最大的作用。可以在显微镜下观察,当细胞界限已十分清楚,从梭形变圆,即已分离为单个细胞,且有少量细胞漂起,则要终止消化了。


3、将消化液倒掉,用eagle液洗涤一次。然后倒掉。


4、加少量1640,用吸管轻轻吹打。


5、吸1/3至1/4的细胞悬液接种至新的培养瓶,然后加8ml的新的细胞培养基,置37度5%的二氧化碳培养箱完成传代。


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