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不常见细菌的快速鉴别方法
发布时间:2019-05-09   点击次数:167次

         一. 不常见革兰阴性菌

         1. 布氏杆菌属

         布氏杆菌属是一类革兰阴性细小杆菌,牛、羊、猪等动物MAX易感染。人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品,均可被感染。布氏杆菌病广泛分布世界各地,我国部分地区曾有流行。布氏杆菌属分为羊、牛、猪、鼠、绵羊及犬布氏杆菌6个种,20个生物型。中国流行的主要是羊、牛、猪三种布氏杆菌,其中以羊布氏杆菌病MAX为多见。
布氏杆菌属细菌为非抗酸性,无芽胞,无荚膜,无鞭毛,呈球杆状(见图1)。血琼脂(BAP)上为透明或半透明、光滑且有光泽菌落。此细菌不在麦康凯琼脂上生长。布氏杆菌属细菌尿素阳性,触酶、氧化酶阳性,而吲哚阴性。由于该菌属细菌具有强的传染性,因此一旦怀疑应送往LRN B级参考实验室进行确认。


         2. 空肠弯曲菌

         空肠弯曲菌是一种人畜共患病病原菌,可以引起人和动物发生多种疾病,并且是一种食物源性病原菌,认为是引起全世界人类细菌性腹泻的主要原因。其致病因素包括粘附、侵袭、产生毒素和分子模拟机制等四个方面,通过分子模拟机制可以引起MAX严重的并发症一格林一巴利综合征。空肠弯曲菌可以通过产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素和细胞致死性膨胀毒素而致病。空肠弯曲菌对红霉素、新霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素等抗生素敏感,但近年发现了不少耐药菌株及多重耐药性菌株。


         空肠弯曲菌菌体轻度弯曲似逗点状。菌体一端或两端有鞭毛,运动活泼,在暗视野镜下观察似飞蝇。有荚膜,不形成芽胞。微需氧菌,在含2.5~5%氧和10% CO2的环境中生长MAX合适,在正常大气或无氧环境中均不能生长,MAX适温度为37~42℃。本菌在普通培养基上难以生长,在凝固血清和血琼脂培养基上培养36小时可见无色半透明毛玻璃样小菌落,单个菌落呈中心凸起,周边不规则,无溶血现象。空肠弯曲生化反应不活泼,不发酵糖类,不分解尿素。可还原硝酸盐,氧化酶和触酶为阳性。能产生微量或不产生硫化氢,甲基红和v-p试验阴性,枸椽酸盐培养基中不生长,在弯曲菌中马尿酸呈阳性反应具有重要鉴定价值。

 

 

         3.“HACEK”群细菌
 

         HACEK是指一组革兰阴性杆菌:嗜血杆菌属(H)、放线杆菌属(A)、人心杆菌属(C)、艾肯菌属(E)、金氏杆菌属(K)。这组微生物的共同特征是易导致心内膜感染,约占全部感染性心内膜炎的5-10%,它们是导致正常人群(非静脉药物滥用者)心内膜炎的常见原因之一。所有这些微生物都是口咽部正常菌群的一部分,生长缓慢、喜好富二氧化碳环境。除心脏瓣膜感染,HACEK菌还导致其他感染:菌血症、各类脓肿、腹膜炎、中耳炎、结膜炎、肺炎、化脓性关节炎、骨髓炎、尿路感染、伤口感染、脑脓肿、牙周感染。
 

         嗜血杆菌属因在生长过程中需含有生长因子X(氯化高铁血红素)和(或)V(辅酶Ⅰ)的血液琼脂而得名。本属细菌为革兰阴性小杆菌,无动力,具有明显的多型性,不形成芽胞,需氧或兼性厌氧。流感嗜血杆菌是嗜血杆菌属MAX重要的病原菌,镜下呈球杆状、长杆状、少数为丝状。粘液型菌株有荚膜,毒力较强。菌落一般为光滑型,若与金黄色葡萄球菌在BAP上共同孵育,则在葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大,这叫做“卫星现象”。原因是金黄色葡萄球菌能合成较多的V因子,促进流感嗜血杆菌的生长。
 

         放线杆菌属为革兰阴性杆菌,有时呈球形、椭圆形(见图3)。兼性厌氧菌,无动力,无荚膜,在含血清或血液的培养基上生长良好,电热恒温培养箱内37℃培养2~3天后形成直径约1mm的菌落。在肉汤培养液中生长呈颗粒状。对人或动物致病的有伴放线放线杆菌、林氏放线杆菌和马驹放线杆菌。伴放线放线杆菌因常见于人类的某些放线菌病的病灶中而得名。但也可单独致病,如一些亚急性细菌性心内膜炎是由本菌引起的。本属细菌能还原硝酸盐,不产生吲哚,尿素阳性。
 

         人心杆菌是心杆菌属内仅有的种,是人的鼻腔和咽喉部的正常菌群,可引起心内膜炎、尿路感染、脑脓肿和牙周炎等疾病。大部分菌株可从血液中分离而来,有的菌株也可从脑脊液中分离而来。人心杆菌为无鞭毛、无荚膜、无芽孢,并具有多形性的革兰阴性杆菌(见图4)。革兰染色不易被脱色,单个存在或成对排列,有时形成短链或呈葡萄状排列。该菌为兼性厌氧菌,某些菌株在初代分离时需要CO2,在生长过程中要有一定湿度,在干燥环境中不生长;在35~37 ℃均可生长,但在22 ℃或42 ℃均不生长。该菌在BAP上不溶血,经24h 培养后菌落很小,48h 后可达1mm,菌落为圆形、凸起、光滑、有光泽而边缘整齐,某些菌株的菌落可长入培养基中,使培养基表面琼脂凹陷。麦康凯琼脂上不生长。人心杆菌氧化酶阳性,触酶阴性,吲哚阳性,不还原硝酸盐。
 

         啮蚀艾肯菌是革兰阴性多形性球杆菌(见图5),有一种漂白剂的气味,兼性厌氧,是口腔和许多其他粘膜表面的正常菌群。啮蚀艾肯菌是人咬伤后发生的蜂窝织炎的病原体,它也是已发现静脉药物滥用者软组织感染和心内膜炎主要病原体。它也能导致各种各样的肺部感染(如脓胸、肺炎、败血症栓子),类似严格偏性厌气菌。
 

         大多数啮蚀艾肯菌性心内膜炎患者有潜在的生物瓣膜病变。与其他HACEK菌不同,大多数啮蚀艾肯菌性心内膜炎与静脉药物滥用有关。啮蚀艾肯菌在培养基上凹陷生长,吲哚阴性,鸟氨酸阳性。
 

         金氏杆菌属是革兰阴性球杆菌,有3个种:
 

         金氏金氏杆菌、产吲哚金氏杆菌、去硝化金氏杆菌,只有金氏金氏杆菌引起心内膜炎。与其他HACEK菌不同,金氏杆菌感染进展相当迅速。金氏金氏杆菌在BAP呈大的、光滑、不透明、白色或米色、β-溶血菌落,与肠杆菌科细菌相似,但在麦康凯琼脂上不生长。金氏金氏杆菌触酶阴性,氧化酶阳性,通常分离自无菌组织和体液。

         4. 土拉热弗朗西斯氏菌

         土拉热弗朗西斯氏菌简称土拉弗氏菌,是引起土拉弗氏菌病(野兔热)的病原菌。人类感染此病多因接触患病动物而致,或摄食污染食物和吸入污染空气所致。土拉杆菌是革兰阴性多形性细菌,镜下呈球状、杆状、豆状和丝状等,无芽胞、无动力、有荚膜。该菌营养要求较高,在普通琼脂培养基和肉汤中均不生长,只在加入
胱氨酸、半胱氨酸、血液或卵黄的培养基中生长,形成圆形、光滑、灰色、凸起、有粘性的菌落,在鸡胚绒尿膜上也能生长,在卵黄囊中生长尤为茂盛,MAX适生长温度35℃ ~37℃ 。若从动物或人体初次分离,一般需要3—5天。常用培养基主要有半胱氨酸葡萄糖血液琼脂平板(Francis培养基)、卵黄琼脂平板和半胱氨酸巧克力琼脂。土拉热弗朗西斯氏菌氧化酶阴性,触酶阴性或弱阳性,β-内酰胺酶阳性。由于该菌具有强传染性,必须在生物安全柜中处理,一旦怀疑需送往LRN参考实验室进行确认。

 

         5. 卡他莫拉菌

         卡他莫拉菌为革兰阴性双球菌。过去一直认为卡他莫拉菌是对人体无致病性的上呼吸道正常寄居菌,但是,近20多年的研究发现,该菌不仅可以引起儿童和老年人的上呼吸道感染,而且还是引起成人下呼吸道感染的重要病原菌,是儿童上颌窦炎、中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位MAX常见致病菌,仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌。卡他莫拉菌在BAP上不溶血,整个菌落可推动,氧化酶、触酶阳性,丁酸盐、吲哚酚醋酸盐阳性。

         6. 奈瑟菌属

         奈瑟菌属细菌为革兰阴性球菌,单个或成双排列,无芽孢、无鞭毛、有菌毛,触酶、氧化酶阳性,包括脑膜炎奈瑟菌(见图7)、淋病奈瑟菌等9种,其中有临床意义的致病菌为脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。BAP上呈透亮不溶血菌落,氧化酶、γ-谷氨酰氨肽酶阳性为脑膜炎奈瑟菌。BAP上呈浅灰色不溶血菌落,氧化酶、β-半乳糖苷酶阳性为乳糖奈瑟菌。淋病奈瑟菌在巧克力琼脂上呈小的、有光泽的菌落,通常在BAP、MH和胰大豆琼脂上生长,氧化酶阳性,触酶强阳性(30%过氧化氢),而γ-谷氨酰氨肽酶、β-半乳糖苷酶阴性。

 

         二. 不常见革兰阳性菌


         1.产单核李斯特菌

         李斯特菌是一种典型的胞内寄生的革兰阳性短杆菌,共分为2个群,7个种。群包括产单核细胞李斯特菌、伊氏李斯特菌、无害李斯特菌(又名英洛克李斯特菌) 、韦氏李斯特菌及西尔李斯特菌;第二群为较少见的格氏李斯特菌和莫氏李斯特菌。其中产单核细胞李斯特菌和伊氏李斯特菌具有致病性,且产单核细胞李斯特菌是惟一能引起人类疾病的,是一种人兽共患病的病原菌,能引起人、畜的李斯特菌病,感染后主要表现为败血症、脑膜炎、流产和单核细胞增多。这种病菌在自然界广泛存在,食品中存在的产单核细胞李斯特菌对人类的安全具有危险,世界卫生组织(WHO)指出,水产品、奶及奶制品、肉制品均有不同程度的污染,并曾将其列为20世纪90年代食品中四大致病菌之一。
产单核李斯特菌是一种革兰阳性短小杆菌,通常成双排列,偶尔可见双球状(见图8)。有鞭毛,但仅在18~20℃有动力,在电热恒温培养箱中37℃动力缓慢。无芽胞,一般不形成荚膜,但在含有血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖荚膜。兼性厌氧,对营养要求不高,普通培养基上可生长,在血平板上会形成β-溶血。MAX适的生长温度是30~37℃,并可在4℃条件下进行冷增菌。本菌耐碱不耐酸,对热较为敏感,加热50℃10min即可死亡同时该菌对多种抗生素敏感,以氨苄青霉素为主,尚有青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等敏感。但该菌对磺胺、杆菌肽和多粘菌素耐药。产单核李斯特菌触酶阳性,马尿酸盐阳性。

2.链球菌属

链球菌属细菌广泛分布于自然界、人和动物肠道、健康人鼻咽部等,致病链球菌可引起各种化脓性炎症、猩红热、风湿热等疾病。本属细菌为革兰阳性球菌,链状排列,无鞭毛,无芽孢,可形成荚膜,在液体培养基中易形成长链,致病性强的菌株多为长链,在脓汁标本中多为短链。本属细菌为需氧或兼性厌氧菌,部分为厌氧菌。营养要求较高,需在加有血液、血清等成分的培养基生长良好。根据链球菌在血液琼脂平板上菌落周围溶血情况,有草绿色溶血环的称为α型溶血,如草绿色链球菌;呈透明溶血环的称为β型溶血,称β溶血性链球菌或化脓性链球菌;也有不溶血的,称为γ型溶血,如肠球菌。根据族特异性抗原将链球菌分A-T 18个族。链球菌属细菌触酶阴性。化脓链球菌(A) PYR阳性。无乳链球菌(B群) 马尿酸盐阳性,CAMP阳性。草绿色链球菌PYR阴性,LAP阳性,胆汁溶菌试验阴性。肺炎链球菌镜下为革兰阳性球菌,矛尖状,成双排列,在人和动物体内形成荚膜,菌落细小、周围有草绿色溶血环,48小时后,由于菌落自溶,呈现“脐窝状”,Optochin敏感试验阳性,胆汁溶菌试验阳性,菊糖分解试验阳性。

 

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